با توجه به اهميت متابوليت¬هاي ثانويه در گياه خرفه در اين تحقيق از روش القاء عصاره مخمر به ريشه¬هاي مويين به عنوان منبع توليد ماده موثره دارويي نورآدرنالين استفاده شد. عصاره مخمر منجر به پايداري ژنتيكي و بيوسنتزي ريشه¬ها و رشد سريع ريشه¬ها ميشود و نيز سيستم مناسبي براي توليد متابوليت¬هاي ثانويه ساخته است. ريشه¬هاي مويين با استفاده از باكتري آگروباكتريوم ريزوژنز سويهAR15834 در ريزنمونه¬هاي بدست آمده از گياهچه¬هاي بذور ايراني خرفه ايجاد شدند. تاييد تراريختي در ريشه¬هاي مويين توسط PCR و با استفاده از آغازگرهاي اختصاصي ژن rolB بررسي گرديد. ريشه¬هاي مويين بعد از گذشت 28 روز از رشد آنها و رسيدن آنها به رشد مطلوب، مورد تيمار با 5 غلظت صفر، 125، 250، 500، 1000 ميلي¬گرم عصاره مخمر قرار گرفتند. بعد از گذشت 48ساعت از تيمار ريشه¬ها با عصاره مخمر، ريشه¬ها از نظر ميزان توليد نورآدرنالين مورد مقايسه قرار گرفتند. نورآدرنالين در ريشه¬هاي مويين خرفه توسط HPLC اندازه گيري شد. نورآدرنالين در ريشه¬هاي تيمار شده توسط عصاره مخمر سنتز گرديد و ريشه هاي مويين تيمار شده، نورآدرنالين بسيار بيشتري نسبت به ريشه هاي مويين تيمار نشده داشتند. با توجه به قابليت رشد اين ريشه در سطح بزرگ و صنعتي بيوراكتورها از ريشه¬هاي تيمار شده براي استحصال نورآدرنالين و ساير متابوليت¬هاي با ارزش گياه در شرايط كنترل شده آزمايشگاهي مي توان استفاده نمود. همچنين عصاره مخمر منجر به كاهش زمان توليد متابوليت¬هاي مهم گياهي شده است و نيز اين ريشه هاي مويين تيمار شده براي بررسي¬هاي مختلف اثر عصاره مخمر و ديگر محرك ها بر روي مسير متابوليتي و مولكولي بيوسنتز نورآدرنالين و ساير متابوليت¬هاي توليدي درخرفه قابليت استفاده دارند.

استخراج اسيدهاي نوكلئيك خالص و كافي از گياهان آبزي به علت دارا بودن رنج وسيعي از متابوليت¬هاي ثانويه، نحوه اشتباه نمونه¬برداري، خصوصيات مرفولوژيكي آنها، مسافت طولاني محل نمونه¬برداري و آزمايشگاه و... معمولاً مشكل و چالش برانگيز است. از آنجا كه كشورمان ايران يكي از منابع غني از گونه¬هاي بارزش و متنوع آبزي است كه در صنايع مختلف از جمله پزشكي، آرايشي و بهداشتي، داروسازي، غذايي و صنعت داراي كاربرد هستند، توجه دانشمندان و محققين بسياري را به خود جلب كرده¬است. بنابراين استخراج DNA خالص جهت مطالعات مولكولي، شناسايي گونه¬ها، حفظ وارزيابي گونه¬ها، جلوگيري از خطر انقراض گونه¬ها، بررسي پراكنش و توزيع آنها و... از اهميت ويژه¬اي برخوردار است. محققين جهت استخراج اسيدهاي نوكلئيك از گياهان آبزي بايد محلول¬هاي مورد نياز را خود بسازند يا از كيت¬هاي غيراختصاصي موجود كه بسيار گران قيمت هستند استفاده كنند كه در نهايت منجر به استخراجي ناموفق و نامطلوب خواهد شد. بنابراين مشكلات و نيازهاي موجود مارا براين واداشت كه محلولي را توليد كنيم كه نه تنها استخراج آسان و ارزان DNA ژنومي با كيفيت و كميت بالا از نمونه¬هاي گياهان آبزي را فراهم سازد بلكه مي¬توان آن را براي كليه گياهان تازه يا خشك شده¬اي كه داراي متابوليت¬هاي ثانويه بالايي هستند را در شرايط درون و بيرون آزمايشگاهي نيز به كاربرد. در محلول ساخته شده غلظت و PH مواد EDTA ، بتا-مركاپتو اتانول، كلريد سديم، تريس-بيس به خوبي تنظيم و دو ماده موثر PVP و سارگوسيل به بافر استخراجي افزوده شد. با تنظيم مواد موجود در بافر استفاده از ماده پر خطر و پرهزينه نيتروژن مايع جهت خرد كردن نمونه¬ها را حذف نموديم و همچنين استفاده از ماده خطرناك فنول جهت استخراج مطلوب¬تر ضرورتي ندارد. ارزيابي كمي و كيفي اسيدهاي نوكلئيك استخراجي توسط بافر توليدي و مقايسه آن با روش¬هاي متدوال ديگر، خلوص و ميزان بالاي DNA استخراج شده توسط بافر توليدي را نسبت به دو روش ديگر به خوبي نشان دادند، به طوريكه نتايج نشان¬دهنده عاري بودن اسيدهاي نوكلئيك استخراجي از تركيبات پروتييني و پلي¬فنولي/ پلي¬ساكاريدي مي¬باشد. به طوركلي بافر توليدي قابليت كاربرد براي كليه دانشگاه¬ها، آزمايشگاه¬ها و مراكز تحقيقاتي گياهي را دارد كه كاربر با خريد يك محلول 100 ميلي¬ليتري، قادر به جداسازي سريع، ايمن، ارزان DNA با كيفيت و كميت مطلوب از چندين نمونه¬هاي گياهان آبزي و يا حتي غيرآبزي كه داراي تركيبات ثانويه بالا هستند جهت اهداف خود مي¬باشد. قابل ذكر است از آنجا كه اين بافر قادر به جداسازي حتي ميزان بسيار كم DNA موجود در بافت¬هاي خشك شده مي¬باشد، بنابراين از آن مي¬توان براي مظالعات نمونه¬هاي هرباريومي چندين سال قبل نيز استفاده كرد.

افزايش راندمان توليد نورادرنالين در ريشه هاي مويين گياه خرفه (Purolact oleracea) تحت تاثير ماده متيل جازمونات با توجه به اهميت متابوليت هاي ثانويه در گياه خرفه در اين تحقيق از روش القاء متيل جازمونات به ريشه هاي مويين به عنوان منبع توليد ماده موثره دارويي نوآدرنالين استفاده شد. متيل جازمونات منجر به رشد سريع ريشه ها، پايداري ژنتيكي و بيوسنتزي ريشه ها ميشود و سيستم مناسبي براي توليد متابوليت هاي ثانويه ساخته است. ريشه هاي مويين با استفاده از باكتري آگروباكتريوم ريزوژنز سويه AR15834 در ريزنمونه هاي بدست آمده از گياهچه هاي بذور ايراني خرفه ايجاد شدند. تاييد تراريختي در ريشه هاي مويين توسط PCR و با استفاده از آغازگرهاي اختصاصي ژن rolB بررسي گرديد. ريشه هاي مويين بعد از ۲۸ روز مورد تيمار با ۴ غلظت صفر، ۵۰، ۱۰۰، ۲۰۰ ميكرومول متيل جازمونات قرار گرفتند و بعد از ۴۸ ساعت از نظر توليد نورآدرنالين مورد مقايسه قرار گرفتند. نورآدرنالين در ريشه هاي مويين خرفه توسط HPLC اندازه گيري شد. نورآدرنالين در ريشه هاي تيمار شده توسط متيل جازمونات سنتز گرديد و ريشه هاي مويين تيمار شده، نورآدرنالين بسيار بيشتري نسبت به ريشه هاي مويين تيمار نشده داشتند. با توجه به قابليت رشد اين ريشه در سطح بزرگ و صنعتي بيوراكتورها از ريشه هاي تيمار شده براي استحصال نورآدرنالين و ساير متابوليت هاي با ارزش گياه در شرايط كنترل شده آزمايشگاهي مي توان استفاده نمود. همچنين متيل جازمونات منجر به كاهش زمان توليد متابوليت هاي مهم گياهي شده است و نيز اين ريشه هاي مويين تيمار شده براي بررسي هاي مختلف اثر متيل جازمونات و ديگر محرك ها بر روي مسير متابوليتي و مولكولي بيوسنتز نورآدرنالين و ساير متابوليت هاي توليدي در خرفه قابليت استفاده دارند.